1 同一时间未液化的标本：该怎么处理？

《WHO：生命体检查与处理过程实验手册》纸片写道：在加热下，通常在 15 分钟内，骨骼无论如何煤油，较少高达 60 分钟或更短时间。

《诊断验证基础》第五版：煤油极快，高达 1 小时或数小时不煤油特指提前煤油症。

特别注意到这里你告诉一小时未有煤油的骨骼该如何处理过程吗？大多数人确实都不告诉，包括此前的我。我在丁香园交流会纸片特别注意到过关于这个难题的发表意见，大多数人都是却说没煤油就那样看、那样报。也有人却说只报 PH、量、煤油时间等。

这些都不对，但是也理所当然，因为书本上没有写，家教也是这样教的。

但是《WHO：生命体检查与处理过程实验手册》这本书纸片就明确指出了关于煤油提前骨骼的处理过程，比如说我们就一起来修习一下。

的煤油

射向到得来罐后很快重现众所周知的半固体凝胶的颗粒螺旋状，通常在加热下几分钟内，开始煤油（显得水蒸气），此时中可见表型混合颗粒螺旋状。随着继续煤油，显得更加匀质和极为水蒸气，在煤油最后阶段仅存留少量的小凝团。在加热下，通常 15 分钟内，骨骼无论如何煤油，较少高达 60 分钟或更短时间。如果 60 分钟仍未有无论如何煤油，理应做日志。在亲戚或使用避得来骨骼，当将骨骼送至实验室时，一般并未有煤油。

较长时间煤油的骨骼确实含有不煤油的胶冻螺旋状颗粒（凝胶螺旋状颗粒螺旋状），这不表明任何诊断意义。然而，病菌蜜的存在确实干扰系统性。

特别注意 1：煤油可以通过如上描述的缘故阳光掩蔽和光学仪器进行识别。随着的煤油，不动的生殖取得活动的能力。如果在光学仪器下掩蔽生殖不动，则无需更短时间来完毕煤油过程。

特别注意 2：煤油后曾，置加热下或 37 摄氏度孵箱中，在一个二维发出声响器上，慢慢地用力混匀或旋转样本罐，最大限度转化成一个均质的骨骼。

特别注意 3：如果在 30 分钟内不煤油，不要开始系统性，而是再更进一步回头 30 分钟。如果 60 分钟后仍未有煤油，按以下配置处理过程。

煤油提前的处理过程

多半确实不煤油，这使得评估显得困难。在这种情况下，无需另行处理过程，机械混匀或蛋白酶消化确实是必要的。

1. 一些骨骼通过加入等体积的生理培养液（如 Dulbecco 磷酸后端盐水），并且用加样器一再更进一步吹打，可使其煤油。

Dulbecco’s 磷酸盐后端液：

（1）Dulbecco’s PBS：将 0.2 g （KCL），0.2 g 磷酸二氢钾（KH2P04）,0.1 g 氯化镁（MgCL2.6 H2O，8.0 g 氯化钠（NaCl），2.16 g 磷酸氢二钠（NaHPO4.7 H2O）和 1.00 gD-加入到 750 ml 纯净水中。

（2）将 0.132 g 氯化钙（CaCl2.2 H2O）溶于 10 mL 纯净水中，边烘烤边极快加入上述氯化钠中。

（3）用 1 mmol/lNAOH 调控 PH 至 7.4.

（4）用纯净水定容至 1000 mL。

正文: 为了防止出现沉淀，CaCl2 理应单独加入，极快加入并慢慢烘烤。

2. 一再更进一步（6~10 次）极快地通过抵在一次性的 18 号钝性针头（内径 0.84 mm）或 19 号针头（内径 0.69 mm）, 可增加的非均匀螺旋状态。

3. 理应用一种抗病毒蛋白水解蛋白酶（EC）柚子反转录消化，最大限度促使煤油。

柚子反转录的正要：

用 Dulbecco 磷酸后端盐水制备 10IU/mL 的柚子蛋白酶反转录。波罗反转录很难溶解，通过烘烤，大部分蛋白酶理无论如何在 15~20 分钟内溶解。用 10IU/mL 的柚子蛋白酶反转录液与等体积的（1:1）（原书为 1+1，理无论如何是手误）进行稀释（1:2），用移液管吸头的尖部烘烤，37 摄氏度孵育 10 分钟。在更进一步系统性此前充分混匀。

特别注意：这些处理过程确实影响精浆的克隆、生殖活力和生殖形态，使用它们才会作日志。当计算生殖浓度时，才会顾虑 1：1（原数位为 1+1，我顾虑理无论如何是错误）加入柚子反转录液使按 1:2 稀释。

尽信书不如无书

一直以来我们都是对家教对前辈听之任之，对于教科书也好似神物一般的崇拜。可惜，我们的教科书缘故多缘故少甚至错误的地方。系统性只是其中小小的一部分，我希望大家都理无论如何在虚心修习的同时，要有怀疑一切的态度。这样我们才会慢慢的去揭示发现，我们才能修习到更多，才能的发展！

主编： 张开平